مطالعه کلونینگ ژن p4 لیشمانیا اینفانتوم تحت توالی سیگنال های dsba و ompa در باکتری e.coli

اشریشیاکلی یکی از میزبان هایی است که به طور گسترده جهت تولید پروتئین های نوترکیب استفاده می شود. تولید پروتئین نوترکیب به شکل اینکلوژن بادی به عنوان مانعی بر سر راه تولید انبوه پروتئین های نوترکیب بوده است. یکی از راه حل های این مشکل ترشح پروتئین های نوترکیب به واسطه توالی های سیگنالی اختصاصی به فضای پری پلاسمیک است. تا فرصت برای تا خوردن صحیح پروتئین نوترکیب و به دنبال آن تولید پروتئین به صورت محلول فراهم آید. کارائی این سیگنال پپتیدها بسته به نوع پروتئین متفاوت بوده است. پروتئین p-4 لیشمانیا اینفانتوم یکی از کاندید واکسن های مهم بر علیه بیماری لیشمانیوز است که هنگام بیان در e. coli به صورت اینکلوژن بادی بیان می گردد. هدف این تحقیق کلونینگ ژن p-4 لیشمانیا اینفانتوم در وکتورهای paes30 و paes31 تحت سیگنال پپتیدهای dsba و ompa جهت کاربردهای بعدی آن در تولید پروتئین p4 نوترکیب به صورت محلول بوده است. برای این منظور ژن p4 باpcr تکثیر گردیده و در وکتور pgem-teasy کلون گردید. سپس ژن کلون شده با روش هضم آنزیمی از این وکتور جدا شده و در وکتور های paes30 و paes31 کلون گردید. به منظور تایید کلونینگ از روش هضم آنزیمی و pcr استفاده شد که در هر دو وکتور باندی در محدوده bp860 مشاهده گردید که تاییدی بر انجام کلونینگ بود. نتایج حاصل از بررسی بیان پروتئین p4 به روش sds-page نشان داد که توالی سیگنالی dsba باعث تولید پروتئین نوترکیب به حالت محلول شده اما توالی سیگنالی ompa هیچ اثری در بیان محلول پروتئین نداشته است.